Criopreservação de sêmen humano: comparação entre métodos de congelação e tipos de envase / Cryopreservation of human semen: comparison between methods of freezing and types of storage

OBJETIVOS: comparar duas diferentes técnicas de congelação e dois tipos de envase do sêmen humano durante processo de criopreservação. MÉTODOS: estudo experimental, no qual foi analisada a criopreservação de 18 amostras de sêmen de 18 voluntários. Após a adição de meio crioprotetor, "Test-yolk buffer" , as amostras de sêmen foram envasadas em palhetas com capacidade de 0,25 mL ou em criotubos de 2 mL e submetidas à criopreservação por dois métodos, um lento e outro rápido, totalizando quatro tratamentos distintos: RP (congelação pelo método rápido e envasado em palheta), RT (rápido-criotubo), LP (lento-palheta) e LT (lento-criotubo). As amostras, após 24 horas, foram descongeladas em temperatura ambiente e mantidas a 37°C. Os dados coletados foram analisados através do teste t de Student, com p<0,05, utilizando o programa de computador SPSS for Windows® versão 11.0.0. RESULTADOS: houve redução da motilidade espermática após o processo de criopreservação. A taxa de motilidade inicial foi 58,1 por cento e as motilidades após os diferentes métodos de criopreservação foram: 19,2 por cento (RP), 27 por cento (RT), 21,1 por cento (LP) e 30,3 por cento (LT). Houve redução significativa na morfologia normal. A taxa de morfologia normal inicial foi 14,2 por cento e as morfologias após os diferentes métodos de criopreservação foram: 12,8 por cento (RP), 12,6 por cento (RT), 12,6 por cento (LP) e 12,4 por cento (LT). CONCLUSÕES: o método de criopreservação lento com envase em criotubo esteve associado à melhor motilidade espermática após o descongelamento. Não houve diferença entre os métodos quando avaliada a morfologia espermática.

PURPOSE: to compare two different methods of freezing and two types of human semen storage during cryopreservation process. METHODS: experimental research in which the cryopreservation of 18 semen samples from 18 volunteers was studied. Following the addition of the cryoprotectant medium, Test-yolk buffer, the semen samples were packaged into 0.25 mL straws or into 2 mL cryotubes and submitted to cryopreservation by slow or rapid methods, in four different treatments: RS (cryopreservation by rapid method and packaged in straws), RT (rapid-cryotubes), SS (slow-straws), and ST (slow-cryotubes). Samples were thawed after 24 hand then maintained at 37°C. Data collected were analyzed by the Student t-test, with p<0.05, using the SPSS computer program for Windows®, version 11.0.0. RESULTS: the motility of spermatozoa decreased after the cryopreservation process. The initial motility rate was 58.1 percent and motilities after the different methods of cryopreservation were 19.2 percent (RS), 27 percent (RT), 21.1 percent (SS) and 30.3 percent (ST). There was a significant decrease of the normal morphology. The initial normal morphology was 14.2 percent and morphologies after the different methods of cryopreservation were 12.8 percent (RS), 12.6 percent (RT), 12.6 percent (SS) and 12.4 percent (ST). CONCLUSIONS: the slow method of cryopreservation with storage in cryotubes showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was no difference among the methods when appraised the morphology.

Criopreservação de sêmen humano / Cryopreservation of human semen

Os primeiros relatos sobre a resistência de espermatozóides a baixas temperaturas, são do século XVIII. Desde então, tem-se investido como melhorar o processo de criopreservação. Atualmente, o sêmen criopreservado pode ser utilizado em várias situações. A criopreservação é indicada rotineiramente para o tratamento de casais inférteis com causa masculina. Pacientes com patologia oncológica que se submeteram a tratamentos quimioterápico e radioterápico mantêm sua fertilidade, quando podem criopreservar o sêmen. A criopreservação de espermatozóides promove danos celulares por diversos mecanismos. Entre os fatores responsáveis por essas crioinjúrias, destacamos: a taxa de queda na temperatura durante o processo, a forma de acondicionamento das amostras a serem criopreservadas, os meios crioprotetores, a forma de manutenção dessas amostras, a taxa de aquecimento durante o descongelamento e variações individuais. Os resultados de tratamentos que utilizam técnicas de reprodução assistida, como Fertilização in vitro e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóides, dependem da qualidade seminal, que está refletida na motilidade e na morfologia espermática. Ainda não há um consenso na literatura sobre qual a melhor técnica para criopreservação de espermatozóides, mostrando a necessidade de novos estudos, para que a qualidade seminal seja cada vez menos afetada durante o processo